Спирамицин – многокомпонентный макролидный антибиотик, который широко применяется в
качестве ветеринарного препарата и кормовой добавки. Спирамицин высокоактивен в отношении
грамположительных бактерий и некоторых видов микоплазмы, что объясняет его широкое
применениев лечении токсоплазмоза, инфекций мягких тканей у крупного рогатого скота, свиней,
птиц и овец. Остатки спирамицина в пищевой продукции, выявляемые вследствие
неконтролируемого использования антибиотика и игнорирования времени выведения препарата,
приводят к развитию аллергических и токсических реакций у потребителей. Кроме того, остатки
спирамицина в продуктах животного происхождения приводят к созданию устойчивых к
антибиотикам штаммов бактерий. Таким образом, актуальность разработки методов определения
спирамицина определяют установленные нормы содержания антибиотика в пищевой продукции для
защиты здоровья потребителей.
Иммуноферментный анализ является скрининговым, быстрым и менее трудоемким методом
оценки остаточного содержания загрязняющих веществ по сравнению c хроматографическими
методами. Для разработки методики определения спирамицина методом твердофазного
конкурентного иммуноанализа получены иммуноген – коньюгат спирамицина с бычьим
сывороточным альбумином (БСА), поверхностный коньюгат спирамицина с БСА, коньюгат
вторичных антител с пероксидазой хрена и коньюгат спирамицина с пероксидазой хрена. Коньюгаты
спирамицина с БСА получены путем прямого взаимодействия белка и спирамицина с дальнейшим
восстановлением тетраборатом натрия. Рассмотрены две схемы конкурентного иммуноферментного
анализа - прямая (одна стадия) и непрямая (две стадии). В случае прямой схемы анализа
конкурентное взаимодействие антигенане наблюдалось, поэтому для определения целевого аналита
выбрана непрямая схема конкурентного иммуноферментного анализа с установленными
оптимальными параметрами (время проведения анализа и условия сорбции иммунореагентов).
Таким образом, разработана высокочувствительная методика определения спирамицина
методом непрямого конкурентного иммуноферментного анализа. Предел обнаружения и диапазон
линейного обнаружения составил 0,5 нг/мл и 1–100 нг/мл, соответственно. При оценке
специфичности разработанной методики процент перекрестного реагирования с другими
антибиотиками группы макролидов составил менее 1%. Время анализа составило около 1,5 часа. Для
оценки эффективности разработанной методики планируется апробация системы в образцах молока и
мяса.
