© Центральный аппарат

В период с апреля по август 2021 года Референтная лаборатория вирусных болезней птиц подведомственного Россельхознадзору ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» принимала участие в сличительных испытаниях, организованных Референтной лабораторией Европейского союза и всемирной организации здравоохранения животных по гриппу птиц и ньюкаслской болезни (Istituto Zooprofilattico Sperimentale delle Venezie, IZSVe, Падова, Италия).

Программа испытаний включала в себя три диагностические панели, разработанные соответственно для тестирования образцов с помощью молекулярных методов (выявление генома вируса), вирусологических (выявление антигена вируса) и серологических (выявление антител) методов.

Для молекулярных исследований в Референтную лабораторию вирусных болезней птиц поступило 15 зашифрованных лиофилизированно высушенных инактивированных изолятов вируса гриппа птиц, парамиксовируса птиц серотипа 1 и проб, не содержащих РНК указанных вирусов. Диагностическая панель состояла из восьми вирусов гриппа птиц, выделенных в странах Европы, Азии и Африки, пяти парамиксовирусов птиц серотипа 1 европейского и американского происхождения и двух отрицательных проб.

В рамках молекулярного раунда необходимо было выявить РНК вируса гриппа птиц и парамиксовируса птиц серотипа 1 и идентифицировать подтипы Н5, Н7, N1, N2, N6, N8 вирусов гриппа птиц методом ОТ-ПЦР, а также охарактеризовать потенциальную вирулентность выявленных вирусов гриппа птиц подтипов Н5, Н7 и парамиксовирусов птиц серотипа 1 с помощью секвенирования сайта разрезания.

В результате проведенных исследований во всех пробах правильно выявлена РНК вируса гриппа птиц и парамиксовируса птиц серотипа 1. Верно идентифицированы подтипы Н5, Н7, N1, N2, N6, N8 вирусов гриппа птиц и корректно охарактеризована потенциальная вирулентность вирусов.

В процессе вирусологического раунда лабораториям-участникам было предложено проверить панель образцов на наличие гемагглютинирующего агента с определением титра в реакции гемагглютинации (РГА) и провести дальнейшую дифференциацию подтипов ВГП А/Н5, А/Н7, А/Н9 и парамиксовируса птиц серотипа 1 с помощью реакции торможения гемагглютинации (РТГА).

Серологический раунд включал тестирование шифрованных проб сывороток крови кур на наличие антител к ВГП типа А в реакции иммуноферментного анализа (ИФА) и к ВГП подтипов Н5, Н7, Н9 иAPMV-1 в РТГА.

Образцы для вирусологии представляли собой 12 лиофилизированных проб, одна из которых - отрицательная (раствор ФБР), 9 образцов содержали антигены ВГП евразийского и африканского происхождения подтиповH5N1,H5N2,H5N8,H5N5,H7N3,H7N7,H9N2 и 2 образца - APMV серотипов 1 и 4.

Серологическая панель состояла из 10 проб сывороток крови кур, отобранных в различные сроки после иммунизации штаммамиAPMV серотипов 6 и 1 и ВГП подтиповH5N1, Н5N2, H5N5, H7N1, Н9N2, а также двух отрицательных проб.

Вирусологические и серологические исследования были выполнены в соответствии с Методическими указаниями по идентификации вирусов гриппа птиц и ньюкаслской болезни в реакции торможения гемагглютинации, разработанными в ФГБУ «ВНИИЗЖ». Постановку РТГА осуществляли с использованием референтных антигенов и сывороток крови, а также коммерческих наборов собственного производства для выявления антител к ВГП подтиповH5 иH9.  Для обнаружения антител к ВГП типа А применяли набор на основе непрямого варианта ИФА, изготовленный ФГБУ «ВНИИЗЖ». 

Согласно финальному отчету провайдера, в ходе квалификационной проверки Референтная лаборатория вирусных болезней птиц ФГБУ «ВНИИЗЖ» показала 100 % сходимость результатов исследований с характеристиками проб, предоставленных в панелях каждого раунда.

Таким образом, была подтверждена компетентность ФГБУ «ВНИИЗЖ» в диагностике особо опасных и экономически значимых инфекционных болезней птиц.