Ежегодно Справочная лаборатория по африканской чуме свиней (CISA-INIA, Мадрид, Испания, EURL) Европейского Союза (ЕС) организует проведение сличительных испытаний по диагностике АЧС для проверки компетенции и уровня подготовки специалистов диагностических лабораторий ЕС и других заинтересованных стран.

В 2017 году референтная лаборатория по АЧС подведомственного Россельхознадзору ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ID 45) третий год подряд приняла участие в данных сличительных испытаниях. Для проведения исследований ФГБУ «ВНИИЗЖ» было получено две панели шифрованных образцов проб (сыворотка (S1-S11) и суспензии органов (T1-T7)) для выявления используемыми в лаборатории методами антител и генома вируса АЧС соответственно. Следует отметить, что для проведения испытаний EURL были представлены отобранные в различные сроки после заражения пробы от животных, заражённых вирусом АЧС отличающимся по степени вирулентности, генотиповой принадлежности, и от животных с различными формами течения: острой и хронической.

Российские специалисты для проведения испытаний по выявлению генома вируса АЧС методом полимеразной цепной реакции использовали разработанную в референтной лаборатории ФГБУ «ВНИИЗЖ» в рамках выполнения НИР учреждения вариант гнездовой ПЦР и коммерческую тест-систему для диагностики АЧС методом ПЦР в режиме реального времени. В рамках испытаний предполагалось провести исследования 11 образцов сыворотки и 7 образцов патологического материала от инфицированных и неинфицированных свиней (рис.1а и 1 b).

Рисунок 1а.

Примечание: POS — положительный результат; NEG — отрицательный результат; WEAK — слабоположительный результат, doubt — сомнительный результат

Рисунок 1b.

Примечание: POS — положительный результат; NEG — отрицательный результат; doubt —сомнительный результат

Результаты исследований специалистов ВНИИЗЖ показали, что в 6 пробах сыворотки крови (S3, S5, S6, S7, S8 и S9) и 5 пробах патологического материала (T2, T3, Т4, Т6 и Т7) присутствует геном (ДНК) вируса АЧС.

При исследовании сывороток крови методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием коммерческой тест-системы для выявления антител «Ingenasa K3» (пр-ль Ingenasa, Испания) и экспериментальной тест системы на основе комплексного антигена, разработанной в референтной лаборатории по АЧС ФГБУ «ВНИИЗЖ» получены следующие результаты (рис. 2а). Подтверждение результатов проводилось рекомендованным МЭБ методом иммуноблотинга. (рис. 2b):

Рисунок 2а.

Примечание: POS — положительный результат; NEG — отрицательный результат; doubt —сомнительный результат

В результате исследований специалисты ВНИИЗЖ определили, что в 5 образцах сывороток (S3, S4, S5, S9 и S10) присутствуют специфические антитела к вирусу АЧС. Результаты иммуноблотинга, как наиболее высокоспецифичного и чувствительного метода, подтвердили эти результаты (рис. 2b).

Рисунок 2b.

Примечание: POS — положительный результат; NEG — отрицательный результат; WEAK — слабоположительный результат, doubt — сомнительный результат

Таким образом, по результатам комплекса различных методов исследований, используемых в референтной лаборатории по АЧС ФГБУ «ВНИИЗЖ», российские специалисты успешно прошли сличительные испытания, правильно поставив диагноз для всех зашифрованных образцов (результаты подтверждены/расшифрованы EURL в Финальном отчете), тем самым подтвердив свою высокую методическую грамотность и квалификацию (рис 3).

Рисунок 3.

Примечание: POS — положительный результат; NEG — отрицательный результат; WEAK — слабоположительный результат, doubt — сомнительный результат

В своем финальном отчете специалисты EURL высоко оценили квалификацию сотрудников, диагностические наборы и тест-системы, используемые для диагностики в референтной лабораторией по АЧС ФГБУ «ВНИИЗЖ»: «Для каждого зашифрованного образца был дан правильный результат, в соответствии с нашими ожиданиями. На основании данных результатов, Справочная лаборатория ЕС установила, что диагностические процедуры, используемые в вашей лаборатории соответствуют необходимому уровню для проведения диагностики полевого материала».

Положительные результаты использования в испытаниях разработанных в ФГБУ «ВНИИЗЖ» диагностических тест-систем для диагностики африканской чумы свиней методом (ПЦР и ИФА) подтвердило перспективность их внедрения в лабораторную практику ветеринарных учреждений Российской Федерации.